上海喆圖科學儀器
Zhetu Scientific Instrument
服務熱線：400-001-0304
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更新時間：2019-04-11
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電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、振蕩水浴搖床、壓力蒸汽消毒器、干熱烤箱、低溫冰箱（－80℃）或液氮生物容器、普通冰箱、天平(精密度0.1g和0.0001g)、混勻振蕩器、勻漿器、菌落計數(shù)器、低溫高速離心機，玻璃器皿、生物安全柜等。
培養(yǎng)基和試劑
0.5mmol/L組氨酸－0.5mmol/L色氨酸－0.5mmol/L生物素溶液
成分： | L-組氨酸（MW155） | 78mg |
| D-生物素（MW244） | 122mg |
| L-色氨酸（MW204） | 102mg |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 1000mL |
配制：將上述成分加熱，以溶解生物素，然后在0.068MPa下高壓滅菌20min。貯于4℃冰箱。若試驗中不使用大腸桿菌，則不添加色氨酸。
頂層瓊脂培養(yǎng)基
成分： | 瓊脂粉 | 1.2g |
| 氯化鈉 | 1.0g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 200mL |
配制：上述成分混合后，于0.103MPa下高壓滅菌30min。實驗時，加入0.5mmol/L組氨酸－0.5mmol/L色氨酸－0.5mmol/L生物素溶液20mL。若試驗中不使用大腸桿菌，則不添加色氨酸。
Vogel-Bonner(V-B)培養(yǎng)基E
成分： | 枸櫞酸(C6H8O7·H2O) | 100g |
| 磷酸氫二鉀(K2HPO4) | 500g |
| 磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4·4H2O) | 175g |
| 硫酸鎂(MgSO4·7H2O) | 10g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 1000mL |
配制：先將前三種成分加熱溶解后，再將溶解的硫酸鎂緩緩倒入容量瓶中，加蒸餾水/去離子水至1000mL。于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。
20%葡萄糖溶液
成分： | 葡萄糖 | 200g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 1000mL |
配制：加少量蒸餾水/去離子水加溫溶解葡萄糖，再加蒸餾水/去離子水至1000mL。于0.068MPa下高壓滅菌20min。儲于4℃冰箱。
底層瓊脂培養(yǎng)基
成分： | 瓊脂粉 | 7.5g |
| 蒸餾水/去離子水 | 480mL |
| V-B培養(yǎng)基E | 10mL |
| 20%葡萄糖溶液 | 10mL |
配制：首先將前兩種成分于0.103MPa下高壓滅菌30min后，再加入后兩種成分，充分混勻倒底層平板。按每皿25mL制備平板，冷凝固化后倒置于電熱恒溫培養(yǎng)箱中24h，備用。
營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基
成分： | :C8H9Cl | 2.5g |
| 胰胨 | 5.0g |
| 磷酸氫二鉀(K2HPO4) | 1.0g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 500mL |
配制：將上述成分混合后，于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。
鹽溶液(1.65mol/L KCl+0.4mol/L MgCl2)
成分： | (KCl) | 61.5g |
KCl | 氯化鎂(MgCl2·6H2O) | 40.7g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 500mL |
配制：在水中溶解上述成分后，于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。
0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)
成分： | 磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O) | 2.965g |
| 磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) | 29.015g |
| 加蒸餾水/去離子水至 | 500mL |
配制：溶解上述成分后，于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。
S9混合液
成分： | 每毫升S9混合液 | |
| 肝S9 | 100μl |
| 鹽溶液 | 20μl |
| 滅菌蒸餾水/去離子水 | 380μl |
| 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液 | 500μl |
| 輔酶II(NADP) | 4μmol |
| 6-磷酸葡萄糖(G-6-P) | 5μmol |
配制：將輔酶II和6-磷酸葡萄糖置于滅菌三角瓶內稱重，然后按上述相反的次序加入各種成分，使肝S9加到已有緩沖液的溶液中。該混合液必須臨用現(xiàn)配，并保存于冰水浴中。實驗結束，剩余S9混合液應該丟棄。
菌株鑒定用和特殊用途試劑
組氨酸-色氨酸-生物素平板
成分： | 瓊脂粉 | 15g |
| 蒸餾水/去離子水 | 934mL |
| (V-B)培養(yǎng)基E | 20mL |
| 20%葡萄糖 | 20mL |
| 滅菌鹽酸組氨酸水溶液(0.5g/100mL) | 10mL |
| 滅菌鹽酸色氨酸水溶液(0.5g/100mL) | 10mL |
| 滅菌0.5mmol/L生物素溶液 | 6mL |
配制：高壓滅菌瓊脂和水后，將滅菌20%葡萄糖，V-B培養(yǎng)基、組氨酸溶液，加進熱的瓊脂溶液中（若試驗中不使用大腸桿菌，則不添加色氨酸，同時蒸餾水/去離子水改為944mL）。待溶液稍微冷卻后，加入滅菌生物素，混勻，澆制平板。
氨芐青霉素平板和氨芐青霉素/四環(huán)素平板
成分： | 瓊脂粉 | 15g |
| 蒸餾水/去離子水 | 930mL |
| (V-B)鹽溶液 | 20mL |
| 20%葡萄糖 | 20mL |
| 滅菌鹽酸組氨酸溶液（0.5g/100mL） | 10mL |
| 滅菌鹽酸色氨酸水溶液(0.5g/100mL) | 10mL |
| 滅菌0.5mmol/L生物素溶液 | 6mL |
| 氨芐青霉素溶液(8mg/mL于0.02mol/L NaOH中) | 3.15mL |
| 四環(huán)素溶液(8mg/mL于0.02mol/L HCl中) | 0.25mL |
配制：瓊脂和水高壓滅菌20min，將無菌的葡萄糖、VB鹽溶液、組氨酸溶液和色氨酸溶液，加進熱的瓊脂溶液中，混勻（若試驗中不使用大腸桿菌，則不添加色氨酸，同時蒸餾水/去離子水改為加940mL）。冷卻至大約50℃，無菌條件下加入四環(huán)素溶液和/或氨芐青霉素溶液。
應該在傾注瓊脂平板后幾天內，制備主平板。
營養(yǎng)瓊脂平板
成分： | 瓊脂粉 | 7.5g |
| 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 | 500mL |
配制：于0.103MPa下高壓滅菌30min后傾注平板。
試驗菌株及其生物學特性鑒定
試驗菌株
采用以下菌株作為標準組合：
鼠傷寒沙門氏菌TA1535；
鼠傷寒沙門氏菌TA97或TA97a或TA1537；
鼠傷寒沙門氏菌TA98；
鼠傷寒沙門氏菌TA100；
鼠傷寒沙門氏菌TA102或大腸桿菌WP2uvrA或大腸桿菌WP2uvrA（pKM101）；
生物學特性鑒定
新獲得的或長期保存的菌種，在試驗前必須進行菌株的生物特性鑒定。
以上內容僅供參考！
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